关于研究ALDH1作为卵巢癌干细胞标志物的实验-论文提纲范文

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研究ALDH1作为卵巢癌干细胞标志物的实验-论文提纲范文

论文预读:研究ALDH1作为卵巢癌干细胞标志物的实验-论文提纲范文

摘要:目前研究证实ALDH1可作为多种肿瘤干细胞的标志,但ALDH1能否作为卵巢癌干细胞标志国内外研究较少且存在争议,尚需更多研究证明。本研究以卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,研究ALDH1在卵巢癌中作用。利用无血清悬浮球培养法诱导SKOV3细胞成悬浮球体,富集干细胞。利用MTT法、平板克隆实验及Transwell侵袭实验检测悬浮细胞球的增殖、克隆、侵袭能力;Hoechst33342染液和Aldefluor染液双染法进行荧光染色,荧光共聚焦显微镜下观察ALDH1在卵巢癌SKOV3细胞内的表达情况;通过流式细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞和悬浮球中ALDH1、CD133表达情况;体外化疗实验富集ALDH1~(high)细胞初步探索ALDH1在卵巢癌细胞中的作用。为ALDH1作为卵巢癌功能性标志物提供证据。研究结果表明:卵巢癌SKOV3细胞接种于无血清培养基中大部分细胞死亡,只有少数细胞悬浮生长,3~4天可以形成结合疏松、形态不规则,细胞数量较少的悬浮球,6~7天悬浮细胞球形态变得规则,细胞结合紧密,状态较好,此时的细胞球经胰蛋白酶消化为单个细胞后可用于后续实验; MTT生长曲线结果显示悬浮细胞球和SKOV3细胞的增殖能力在第1~2天无差异,从第3天开始悬浮细胞球增殖能力高于SKOV3细胞,差异有统计学意义(P0.05)。平板克隆实验结果:悬浮细胞球和SKOV3细胞的克隆形成率分别为35.23±5.89%、20.32±6.42%,2组细胞克隆形成率差异有统计学意义(P0.05);Transwell侵袭实验结果表明悬浮球穿过膜数为237±30.42,SKOV3细胞穿膜数为87.8±32.13,差异有统计学意义(P0.05)。荧光化学染色法显示ALDH1定位表达于SKOV3细胞的胞浆,且在SKOV3细胞中ALDH1表达强弱程度不一,ALDH1活性越高,经其作用后产生的荧光底物越多,细胞胞浆显示的荧光就越强;经Hoechst33342和Aldeflour双染后,SKOV3细胞轮廓清晰,胞浆区和细胞核区荧光强弱对比明显,SKOV3细胞核经Hoechst33342染色后显示为蓝色荧光,而ALDH1~(high)细胞核不被染色;流式细胞仪检测ALDH1~(high)细胞在卵巢癌SKOV3细胞中比例很低,仅占4.08±0.29%,CD133~+细胞比例为1.21±0.34%,这符合肿瘤干细胞比例低的特性;而无血清悬浮细胞球培养可使ALDH1~(high)细胞、CD133~+细胞富集,悬浮细胞球中ALDH1~(high)、CD133~+细胞比例分别为22.42±2.42%和10.34±1.17%,明显高于SKOV3细胞,差异有统计学意义(P0.05);体外化疗实验表明顺铂连续作用于卵巢癌SKOV3细胞72小时后ALDH1~(high)细胞比例增高为17.25±3.26%,增加了3.23倍,CD133~+细胞比例为4.04±0.86%,增加了2.34倍,说明了ALDH1~(high)细胞、CD133~+细胞具有更强的生存能力,而ALDH1low细胞及CD133—细胞者则不具备。结论:1. ALDH1~(high)细胞和CD133~+细胞在卵巢癌中所占比例低,分别为4.08±0.29%和1.21±0.34%。2. ALDH1~(high)细胞和CD133~+细胞在悬浮细胞球及顺铂作用后得到富集。3.悬浮细胞球中ALDH1~(high)细胞比例是CD133~+细胞比例的2倍以上。4. ALDH1可作为卵巢癌干细胞标志物。 关键词:卵巢癌 肿瘤干细胞 ALDH1 CD133
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  • 前言4-6
  • 中文摘要6-8
  • Abstract8-13
  • 第1章 绪论13-15
  • 第2章 文献综述15-28
  • 2.1 肿瘤干细胞研究进展15-18
  • 2.1.1 肿瘤干细胞特性15-16
  • 2.1.2 肿瘤干细胞调控机制16-18
  • 2.2 肿瘤干细胞研究的临床意义18-19
  • 2.3 卵巢癌干细胞研究进展19-23
  • 2.3.1 卵巢癌干细胞的分离方法19-20
  • 2.3.2 卵巢癌干细胞鉴定20
  • 2.3.3 卵巢癌干细胞标志物及相关性研究20-22
  • 2.3.4 卵巢癌干细胞研究新挑战22-23
  • 2.4 ALDH1 作为肿瘤干细胞标志物的相关研究23-26
  • 2.4.1 基于 ALDH1 活性的肿瘤干细胞分选24
  • 2.4.2 ALDH1

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