关于探讨动态增强核磁共振显像监测硼替佐米对肿瘤微循环的影响-毕业论文格式模板

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探讨动态增强核磁共振显像监测硼替佐米对肿瘤微循环的影响-毕业论文格式模板

论文预读:CCP3)阳性百分比(即整体凋亡率、肿瘤细胞凋亡率和肿瘤血管内皮细胞凋亡率);定性观察发生凋亡的肿瘤血管内皮细胞所处微血管的组织学形态特征及凋亡对局部微血管功能(即血流灌注)的影响;定量分析硼替佐米治疗后肿瘤血流示踪剂Hoechst33342(?)阳性百分比。(?)分析硼替佐米的抗肿瘤效应与肿瘤局部乏氧微环境和乏氧应答抑制间的关探讨动态增强核磁共振显像监测硼替佐米对肿瘤微循环的影响-毕业论文格式模板

摘要:[研究目的]:新一代多靶向抗肿瘤药物蛋白酶体抑制剂硼替佐米已被批准用于多发性骨髓瘤和蔓状细胞淋巴瘤的临床治疗,但其在实体瘤的应用尚处临床试验阶段,明确其抗实体瘤的关键生物学机制、建立早期疗效评价指标、早期筛选对治疗有效的患者是治疗成功与否的关键。体外研究发现硼替佐米对乏氧状态下的肿瘤细胞和血管内皮细胞均有较强的选择性细胞毒性作用;临床活检标本发现其显著抑制细胞乏氧应答,降低细胞应对乏氧负荷的能力;血管内皮细胞的损伤可能影响微血管的功能,降低微循环血流,进一步加重肿瘤细胞的损伤。本研究拟1)在组织学水平明确治疗前肿瘤乏氧微环境在硼替佐米治疗肿瘤中的作用以及硼替佐米对肿瘤微循环的影响.2)探讨通过动态增强核磁共振显像监测硼替佐米对肿瘤微循环的影响,进而间接反映硼替佐米抗肿瘤生物学效应的可行性。[研究方法]:应用已建立的含双乏氧应答报告基因--9个乏氧反应元件(hypoxia response element, HRE)驱动的单纯疱疹病毒1胸苷激酶(herpes simplex virus type1thymidine kinase, HSV1-TK)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, eGFP)融合基因的HT29人结直肠癌细胞株(HT29-9HRE-TKeGFP,简称HT29-9HRE)及其移植瘤模型进行如下研究。1)体外实验:验证硼替佐米能够有效抑制HT29-9HRE细胞的乏氧应答。常氧(21%02)/乏氧(0.2%02)条件下培养,同时给予不同药物浓度的硼替佐米治疗,流式细胞仪检测乏氧应答报告基因eGFP的表达,液体闪烁仪测定乏氧应答报告基因TK的功能,蛋白质免疫印迹法检测乏氧诱导因子-1α亚单位(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)及乏氧应答下游产物碳酸酐酶9(carbonic anhydrase9, CA9)的表达,酶联免疫吸附法测定乏氧应答下游产物血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的浓度,每项实验至少重复三次。2)体内实验:在组织学水平明确治疗前肿瘤乏氧微环境在硼替佐米抗肿瘤中的作用及其与乏氧应答抑制之间的关系,以及硼替佐米对肿瘤微循环的作用。右下肢皮下荷HT29-9HRE移植瘤裸鼠随机分为硼替佐米(2mg/kg)治疗组或PBS对照组(8-10只/组)。荷瘤鼠于治疗前2小时、治疗后20小时和治疗后24小时分别被给予外源性乏氧示踪剂pimonidaze、外源性乏氧示踪剂EF5、血流示踪剂Hoechst33342,1分钟后处死。随后即刻取瘤、包理、冰冻、固定、常规/荧光免疫组化染色、显微镜检查,并行以下分析:(?)评价硼替佐米对HT29-9HRE移植瘤的抗肿瘤疗效及其对肿瘤微循环的作用-——定量分析硼替佐米/PBS治疗后24小时,肿瘤整体、肿瘤细胞、肿瘤血管内皮细胞的凋亡标志物cleaved caspase3(CCP3)阳性百分比(即整体凋亡率、肿瘤细胞凋亡率和肿瘤血管内皮细胞凋亡率);定性观察发生凋亡的肿瘤血管内皮细胞所处微血管的组织学形态特征及凋亡对局部微血管功能(即血流灌注)的影响;定量分析硼替佐米治疗后肿瘤血流示踪剂Hoechst33342(?)阳性百分比。(?)分析硼替佐米的抗肿瘤效应与肿瘤局部乏氧微环境和乏氧应答抑制间的关系——将肿瘤大体组织切片显微镜图像划分为一系列1x1mm2的微小区域,依据第一个乏氧示踪剂pimonidazole在各区域内的分布情况,将肿瘤局部微环境的初始乏氧程度分为轻(10%)、中(10%)、重(20%)三度。定性、定量分析不同初始乏氧程度肿瘤微环境内,硼替佐米治疗组和PBS(?)照组的凋亡标记物CCP3(抗肿瘤效应)、内皮细胞标记物CD31(微血管的形态)、血流示踪剂Hoechst33342(微循环功能)、两个乏氧示踪剂pimonidazole和EF5(乏氧的动态变化)、以及乏氧应答下游产物CA9(乏氧应答情况)空间分布的差异。3)动态增强核磁共振显像(Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging, DCE MRI):活体监测硼替佐米治疗后肿瘤血流的动态变化。右季肋部皮下荷HT29-9HRE移植瘤裸鼠,应用自制1H MR螺线圈,行移植瘤局部初始DCE MRI检查,随后随机分为非治疗组、单剂量(2mg/kg)治疗组和双剂量(1.5mg/kg,两次给药间隔24小时)治疗到

论文随机片段:氧应答情况)空间分布的差异。3)动态增强核磁共振显像(Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging, DCE MRI):活体监测硼替佐米治疗后肿瘤血流的动态变化。右季肋部皮下荷HT29-9HRE移植瘤裸鼠,应用自制1H MR螺线圈,行移植瘤局部初始DCE MRI检查,随后随机分为非治疗组、单剂量(2mg/kg)治疗组和双剂量(1.5mg/kg,两次