关于浅谈肠道病毒71型分离鉴定及其致病机制的初步-毕业论文提纲

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浅谈肠道病毒71型分离鉴定及其致病机制的初步-毕业论文提纲

论文预读:LY107全序列测序结果设计VP2、3D区扩增引物,以构建表达载体VP2-pBluescriptSK(+)、3D-Flag-pcDNA3.1,通过体外转染细胞来表达蛋白,并检测蛋白的致细胞病变作用。乳酸脱氢酶实验(LDH)检测不同临床症状病毒株的VP2蛋白、3D蛋白对细胞损伤的影响,Annexin-V与PI的联合使用可检测3D蛋白引起的细胞凋亡情况,通过MTT实验来检测3D蛋白浅谈肠道病毒71型分离鉴定及其致病机制的初步-毕业论文提纲

摘要:肠道病毒71型(enterovirus71, EV71)为小RNA病毒科肠道病毒属的成员,足引起婴幼儿手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的主要病原体之一。轻症患者只引起发热、疱疹等症状,重症患者会引起严重的中枢神经系统(central nervous system, CNS)症状如无菌性脑膜炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹等,病死率较高。目前EV71的致病机制尚不明确,不同临床症状的产生可能是由于病毒毒力不同,也可能是个体易感性的不同。本研究首先采集HFMD患儿的粪便标本,运用RD细胞分离肠道病毒并对其进行EV71的鉴定:其次对EV71的全基因组序列进行分析,寻找基因组序列的差异;最后分别在5'UTR、VP2、3D区的基础上对EV71的致病机制进行研究,以寻找EV71致神经系统病变的原因,为阐明EV71的致病机制提供重要基础。目的1.从HFMD患者的粪便标本中分离EV71,为进一步的序列研究提供基础。2.了解山东省临沂市分离的EV71病毒株的全基因组序列特征,寻找不同临床症状病毒株基因组序列上的差异,为进一步研究提供毒力候选位点3.对FV715'UTR、VP2、3D区的毒力候选位点进行研究,探索EV71的致病机制。方法1.将采集自200%2010年山东省临沂市HFMD患者的粪便标本进行处理,接科,于RD细胞进行初步分离,运用肠道病毒通用引物及EV71特异性引物对分离到的病毒RNA进行RT-PCR扩增,筛选出EV71。2.根据GenBank中EV71的基因组序列设计引物,对SDLY11病毒株进行全基因组序列扩增并测序,运用DNAstar和MEGA4软件对EV71的全基因组序列进行分析。3.根据SDLY01、SDLY11、SDLY48、SDLY96、SDLY107、SDLY153病毒株的全基因组序列设计引物,对8株EV71的5UTR区进行RT-PCR扩增并序列分析。4.参考SDLY11、SDLY107全序列测序结果设计VP2、3D区扩增引物,以构建表达载体VP2-pBluescriptSK(+)、3D-Flag-pcDNA3.1,通过体外转染细胞来表达蛋白,并检测蛋白的致细胞病变作用。乳酸脱氢酶实验(LDH)检测不同临床症状病毒株的VP2蛋白、3D蛋白对细胞损伤的影响,Annexin-V与PI的联合使用可检测3D蛋白引起的细胞凋亡情况,通过MTT实验来检测3D蛋白对细胞增殖的影响。结果1.本研究分离了2009~2010年的24份标本,经初步鉴定20份标本为EV71,4份标本为非EV71的肠道病毒,其中采集自2009年的22份样本中有18例为EV71(81.8%)。2. SDLY11病毒株基因组全长7405nt,5'UTR包含742nt,3'UTR包含84nt,中间为6579nt的ORF,编码2193个氨基酸的多聚蛋白。经序列分析显示SDLY11属于V71的C4亚型。通过轻重症重症患者病毒株进行比对分析发现5UTR中的2处核苷酸突变(T40C、C575T)及VP2区的氨基酸突变(T144S)可能与病毒引起不同临床症状有关3.8株EV71分离株的5UR区核苷酸序列为741nt~745nt,与C4亚型的同源性最高,同临床症状病毒株的5UTR进行序列比对发现有2处枋苷酸位点突变(G265A、(703T)。4. SDLY11、SDLY107两个病毒株的VP2蛋白均可在Vero细胞中表达,LDH实验对VP2蛋白引起的细胞损伤程度进行分析,结果显示两组未出现明显不同。5. SDLY11、SDLY107的3D蛋白可在RD细胞中表达,LDH实验结果显示SDLY11株3D蛋白转染组造成的细胞损伤程度大于SDLY107株3D蛋白转染组,细胞凋亡结果未有明显不同,而进一步的MTT实验结果显示,SDLY107株3D蛋白转染组的细胞增殖能力强于SDLY11株3D蛋白转染组。结论1.初步判定2009年山东省临沂市流行的HFMD以EV71为主,SDLY11为C4亚型,为近年来中国大陆地区流行的EV71亚型。2.5'UTR区的4处突变(T40C、G265A、C575T、G703T)可能与病毒产生的神经系统症状相关,这可为进一步的研究提供候选位点。3.不同临床症状病毒株的VP2蛋白可能对细胞损伤的影响不大,但3D蛋白会引起细胞损伤情况、细胞增殖能力的不同,这为EV71致病机制的研究提供了重要基础。 关键词:肠道病毒71型 手足口病 序列分析 神经毒力 致病机制
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论文随机片段:为EV71致病机制的研究提供了重要基础。                  关键词:肠道病毒71型  手足口病  序列分析  神经毒力  致病机制本文由{#GetFu1 2 下一页