关于探讨慢病毒介导的cbfα1和satb2对Wistar大鼠牙周缺损修复再生作用的-****本科毕业论文

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探讨慢病毒介导的cbfα1和satb2对Wistar大鼠牙周缺损修复再生作用的-****本科毕业论文

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摘要:目的:牙周病作为人类最普遍的口腔疾病,在全世界范围均有较高发病率,是造成成年人牙齿缺失的主要原因之一,严重危害着广大民众的口腔和系统健康[1],其最主要的病理变化就是牙周组织的吸收破坏。如何达到理想的牙周复合组织的结构恢复和功能重建是当今牙周组织工程研究的热点所在[2]0核心结合因子al(core binding factoral,Cbfal),是骨骼发育极为重要的转录因子。它不仅对成骨细胞的分化和功能有重要作用[3],而且在牙胚发育中也起着重要作用,是牙源性细胞株所必须的转录因子[4]。它能够与顺式反应元件(Osteoblast-specifics-acting elements,OSEs)特异结合,启动多个成骨特异性基因[5]。特殊富含AT序列结合蛋白(special AT-rich sequence binding protein,Satb)-2是一种核基质蛋白,它可以与成骨分化相关的重要调控转录因子Cbfal.Osterix以及Atf4等协同作用,在成骨细胞的分化、牙和颅颌面的发育中起重要作用[6、7、8]。骨形成是受多个转录因子和骨形成基因调控的复杂过程,本实验通过同时研究两个介由不同途径对骨形成和成骨细胞分化起作用的转录因子,以期为骨组织工程信号分子的选择提供一定的支持。慢病毒载体能够高效持久的表达目的基因,是基因治疗领域中应用广泛的种基因转移工具。课题组前期成功获得了高滴度的Cbfal.Satb2共表达及分别表达的慢病毒载体(Lentivirus vector,LVs)Plenti6.3-Cbfal-IRES-Satb2(pL-cs). Plenti6.3一Cbfal-IRES-Egfp (pL-c).Plenti6.3-Satb2-IRES-Egfp (pL-s). Plenti6.3-IRES-Egfp(pL-e)[9]。本实验的目的是通过建立起Wistar大鼠牙周缺损模型,探讨由慢病毒介导的Cbfα1、Satb2对大鼠牙周缺损修复效能的影响。方法:实验纳入40只体重160~180g的雄性Wistar大鼠,随机分为空白对照组、pL-c组、pL-s组、pL-cs组、和pL-e组五组,每组8只大鼠,各组又分2周和4周两个时间段。实验采用双侧下颌骨牙周缺损模型,即在双侧下颌骨第一磨牙附近建立一5mm×4mm×1mm大小直达根面的缺损。把明胶海绵与25μ1生理盐水、含相同病毒量的pL-c、pL-s、pL-cs、pL-e的终体积为25μ1的慢病毒悬液分别复合,复合物移植入动物下颌骨缺损处。术后2周、4周时处死大鼠取材,利用脱钙组织切片Cbfα1、Satb2免疫组化染色及统计学分析检测基因的超表达情况;利用脱钙组织切片HE染色、Masson染色、骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)免疫组化染色以及组织学测量评价骨缺损和牙周缺损的修复情况;同时取硬组织切片行Masson染色观察骨缺损和牙周缺损的修复情况。结果:Cbfα1、Satb2免疫组化及统计分析结果显示,第三代慢病毒系统能够感染缺损区细胞,上述基因在Wistar大鼠牙周缺损内成功超表达,pL-c感染组Cbfα1表达量增加了6.9倍(P0.05),pL-s感染组Satb2表达量增加了3.8(P0.05),pL-cs感染组外源基因Cbfα1、Satb2表达量分别增加了5.2和2.9倍(P0.05)。HE染色、Masson染色、BSP、OPN免疫组化染色及统计分析结果显示pL-c、pL-s、pL-cs组牙周修复再生能力均强于空白对照组及pL-e组(P0.05);2周时pL-c、pL-s组的成骨能力均强于pL-cs组,而pL-c组成骨能力最强(P0.05);4周时pL-c组成骨能力虽仍强于pL-s组,但二者均弱于pL-cs组成骨能力(P0.05)结论:慢病毒介导的Cbfα1、Satb2对Wistar大鼠牙周缺损均有较强修复再生作用。2周、4周时Cbfα1基因的成骨作用强于Satb2基因。4周时Cbfα1与Satb2共表达基因的成骨能力强于Cbfα1基因和Satb2基因。 关键词:慢病毒 Cbfα1 Satb2 牙周组织再生
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  • 目录4-5
  • CONTENTS5-6
  • 中文摘要6-8
  • ABSTRACT8-12
  • 前言12-16
  • 材料

论文随机片段:染色、Masson染色、骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)免疫组化染色以及组织学测量评价骨缺损和牙周缺损的修复情况;同时取硬组织切片行Masson染色观察骨缺损和牙周缺损的修复情况。结果:Cbfα1、Satb2免疫组化及统计分析结果显示,第三代慢病毒系统能够感染缺损区细胞,上述基因在Wistar大鼠牙周缺